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探討無血清培養(yǎng)基的一些主要補(bǔ)充因子
發(fā)布時間： 2022-11-07 點擊次數(shù)： 1336次無血清培養(yǎng)基是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的全培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長因子）的能力；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無血清培養(yǎng)基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標(biāo)。補(bǔ)充因子是代替血清的各種因子的總稱。多數(shù)無血清培養(yǎng)液必須補(bǔ)加3-8種因子。胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白是必須補(bǔ)充因子，其他多數(shù)為輔助作用的因子。按其功能不同，補(bǔ)充因子可分為以下五類：1.激素和生長因子很多細(xì)胞用無血清培養(yǎng)時需要加?激素，如胰島素、生長激素、胰?糖素等。胰島素是重要的細(xì)胞存活因子，與細(xì)胞上的胰島素受體結(jié)合后可促進(jìn)RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成，抑制細(xì)胞凋亡。此外，雌?醇、孕酮等也是無血清培養(yǎng)基中常添加的補(bǔ)充因子。2.結(jié)合蛋白常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白與細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合是細(xì)胞獲取鐵元素的主要來源。白蛋白與脂類、激素、維生素、?屬離子和生長因子結(jié)合后可調(diào)節(jié)上述物質(zhì)在無血清培養(yǎng)基中活性的作用，此外，由于牛血清白蛋白?般添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。3.貼壁因子許多細(xì)胞必須貼壁才能生長，這種情況下無血清培養(yǎng)基中?定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子，?般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對許多細(xì)胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖粘連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞、CHO細(xì)胞等。4.酶抑制劑培養(yǎng)貼壁生長的細(xì)胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中不可少須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。5.其他補(bǔ)充因子?些細(xì)胞培養(yǎng)使用的無血清培養(yǎng)基還需要補(bǔ)充微量元素、維生素、脂類等低分子量物質(zhì)。
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