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幾個經(jīng)典的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法分享

發(fā)布時間： 2022-10-11　　點擊次數(shù)： 1518次

　　理想的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點。
　　下面分享幾個經(jīng)典的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法：
　　1.人工脂質(zhì)體法
　　帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成復(fù)合物，進而可被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)型好，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。
　　2.磷酸鈣法
　　通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見”的磷酸鈣-DNA共沉淀，可使共沉淀中濃縮DNA分子與細(xì)胞表面結(jié)合并通過內(nèi)吞作用進入細(xì)胞。該法可用于瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對許多類型的細(xì)胞培養(yǎng)物(尤其是原代細(xì)胞)具有細(xì)胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差。
　　3.電穿孔法
　　此法利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，使得DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入穩(wěn)定/瞬時性轉(zhuǎn)染，適用于所有類型的細(xì)胞，但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大，且需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。
　　其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊，可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細(xì)胞內(nèi)，適用于瞬時性轉(zhuǎn)染。該技術(shù)需要昂貴的設(shè)備，且細(xì)胞死亡率較高。而后者則是通過精細(xì)的注射針將核酸送入胞漿中，一次只能輸送一個細(xì)胞中，適用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物或輸送人工染色體。

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