材料與儀器

新鮮豚鼠血
Hanks液 小牛血清 199培養(yǎng)液 生理鹽水 氯化鈉溶液
離心管 離心機(jī)

步驟

1.  AET-RRBC制備

注意事項(xiàng)

1. 分離B細(xì)胞過(guò)程較長(zhǎng)，為了避免B細(xì)胞自然死亡，在最后沖洗B細(xì)胞時(shí)可以用1640,而且要加入5一10%的小牛血清。

2. 每次洗滌時(shí)，不要將試管底部液體吸干，即防止壓積的B細(xì)胞接觸空氣。

3. 使用抗B淋巴細(xì)胞血清與受檢細(xì)胞按NIH方法進(jìn)行微量B細(xì)胞毒試驗(yàn)，使用倒置相差顯微鏡讀數(shù)。

常見(jiàn)問(wèn)題

關(guān)于從小鼠脾臟中分離：

1.脾臟組織所含結(jié)締組織比較少，可以直接在篩網(wǎng)上研磨，無(wú)需剪碎，也不用顧慮血管。

2.ficoll中含多聚糖，所以許多人喜歡把它放4度存放，是否室溫對(duì)實(shí)驗(yàn)影響不大脾臟分離淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)比較簡(jiǎn)單，所以用普通的淋巴細(xì)胞分離液就行。

3 .離心2000rpm×20min，這步很關(guān)鍵，還有就是加細(xì)胞懸液時(shí)一定要貼壁緩慢加入，不要破壞分界面，分離液與細(xì)胞懸液我常用1：2，還有就是所選用的離心管粗細(xì)也會(huì)影響分層。

4.中間的懸浮白色環(huán)狀細(xì)胞層即是所要的淋巴細(xì)胞層。

5.洗細(xì)胞主要是洗去分離液，所以不能省去。