多片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）

1. 產(chǎn)品描述：

信勵致和®多片段無縫克隆試劑盒基于DNA序列同源性進行片段重組，可快速將單個或多個片段定向克隆到任意線性化載體中。本試劑盒含有的2×多片段無縫克隆混合液可將載體和片段的同源區(qū)域從雙鏈的3' 端進行重組連接，最終得到的無缺口閉環(huán)質(zhì)粒可直接轉(zhuǎn)化，完成定向克隆。該試劑盒克服了酶切位點的限制，僅需在插入片段PCR引物5' 端引入線性化載體的末端序列，使得插入片段5' 端和3' 端帶有線性化載體兩端一致的序列（15~25 bp），即可實現(xiàn)插入片段的定向重組。重組反應(yīng)可在恒溫條件下快速進行（50 ℃處理15 min），配合靈活的PCR 產(chǎn)物處理方式和快速轉(zhuǎn)化方法，數(shù)小時內(nèi)即可完成從DNA樣品準(zhǔn)備到重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化涂板培養(yǎng)的全部操作。

2. 產(chǎn)品特點：

（1）無需考慮酶切位點，基于序列同源性反應(yīng)15 min即可實現(xiàn)載體與片段的快速重組。

（2）插入片段的PCR產(chǎn)物正確且單一，無需純化，可直接與載體進行重組反應(yīng)。

（3）可以選擇性進行 5 min 快速轉(zhuǎn)化 E.coli 感受態(tài)細(xì)胞。

（4）可輕松實現(xiàn) 1~5個片段同時定向構(gòu)建進入載體。

多片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）
使用說明

1. 產(chǎn)品組分：

2. 儲運條件：

-25~-15℃存儲，有效期12個月， 干冰運輸。

3. 注意事項：

（1）片段擴增用模板、引物、線性化載體、高保真聚合酶、感受態(tài)細(xì)胞、ddH2O需要自備。

（2）重組產(chǎn)物冰上冷卻后，可直接轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化時重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化體積最多不應(yīng)超過所用感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。

（3）純化或回收的載體或目的片段品質(zhì)較差會顯著降低克隆陽性率。

（4）菌落少時，建議轉(zhuǎn)化時適當(dāng)增加重組產(chǎn)物的量，或者增加菌液涂布量。

（5）隨著重組質(zhì)粒長度的增加，克隆效率降低，建議增加引物重疊序列長度或適當(dāng)延長反應(yīng)時間。