簡介：

免疫熒光技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。傳統(tǒng)實驗方法用小玻片，先泡酸、再晾干、再 coating、再種細胞、染色、封片成像。

本文章使用新方法，我們將描述在通道載玻片內(nèi)培養(yǎng)大鼠成纖維細胞（Rat1）的單個實驗案例。然后，我們用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白細胞骨架，并用DAPI對細胞核進行復染。

實驗步驟：

培養(yǎng)，固定，染色，成像

培養(yǎng)：

1.在無菌條件下打開ibidi μ-Slide并將其放在μ-Slide架（80003）上。將Rat1細胞懸浮液加入通道中。

2.用提供的蓋子輕輕地蓋住儲液器。可以部分關閉它們。

3.將架子放入培養(yǎng)箱（37°C; 5％CO2）中，讓細胞附著（60分鐘）。然后用無細胞培養(yǎng)基填充兩個儲庫。

4.培養(yǎng)過夜。

固定細胞：

1.通過使用細胞培養(yǎng)抽吸裝置或移液管從儲庫中吸出整個培養(yǎng)基。用Dulbecco's PBS洗滌細胞，緩慢地將液體施加到一個空的儲液器中，并從對面的儲液器中吸出。

2.通過在PBS中使用3.7％多聚甲醛以相同的方法固定細胞。從通道的另一側(cè)移除儲液器的液體并等待10分鐘。

洗滌封閉：

1.用PBS洗滌細胞。

2.在PBS中使用0.1％Triton®X-100溶液通透3-5分鐘。

3.在PBS溶液中施加μl的1％BSA 溶液封閉20分鐘。

4.用PBS洗滌細胞

染色鏡檢

1.從通道中清除所有液體。從通道中吸出液體后，不要讓通道干燥。

2.用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽（1Unit+500μl PBS+ 1％BSA，InvitrogenCorp.）在室溫下培養(yǎng)20分鐘。

3.用PBS洗滌細胞并清空通道。

4.施用DAPI（0.1μg/ ml，Sigma-Aldrich）3-5分鐘。

5.用PBS洗滌細胞并除去所有液體。用滴管瓶注入 Ibidi封片油。用提供的蓋子蓋住儲液器。μ-Slide可以存儲大約4周。

6.在熒光顯微鏡下選擇適當?shù)臑V鏡，也可以使用浸油觀察細胞。

優(yōu)點：

1.高分辨率成像

  ibidi載玻片非常適合寬場熒光、共焦成像、FRAP、FRET、FLIM和相差成像。

2.操作快速、簡單

  一體式腔室簡化了您的免疫熒光實驗流程。

3.經(jīng)濟高效的實驗

  僅需少量細胞和少量試劑。

  深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線，在各個領域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術支持與服務。