簡介：

  BMSCs即為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，是骨髓中基質(zhì)細(xì)胞，是骨髓的支持結(jié)構(gòu)，并可作為滋養(yǎng)層支持骨髓中造血干細(xì)胞的生長，因此也被稱為骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。作為干細(xì)胞的一種，它同樣具有多向分化潛能，在一定的環(huán)境和細(xì)胞因子的作用下，可被誘導(dǎo)分化為骨細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞等。其可被定義為具有多分化能力并且能自我更新復(fù)制的骨髓間質(zhì)細(xì)胞。其各項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)，使得它在臨床干細(xì)胞移植治療中顯示出極大的應(yīng)用場景。目前已廣泛使用在修復(fù)軟骨損傷、神經(jīng)細(xì)胞再生等領(lǐng)域。

材料與儀器:

• 燒杯、眼科剪、鑷子、紗布、巴氏滴管、1ml注射器、血清、α-MEM（含L-丙氨酰-L谷氨酰胺/核苷）、PBS、60mm培養(yǎng)皿、T25培養(yǎng)瓶、15ml試管、雙抗（青霉素、鏈霉素）D -hank’s液體

• 血清的保存方式：50ml離心管，分裝凍存-20攝氏度

• 胰蛋白酶的保存方式：25%的胰酶，用的時(shí)候-4℃，不用放-20℃凍存

• 高溫滅菌：高溫袋子、滅菌指示帶、燒杯、鑷子

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)配置溶液：

• 50mL的10%培養(yǎng)基：44.5ml的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（現(xiàn)配現(xiàn)用）+5ml FBS（10%）+ 0.5ml雙抗（1%）

• 10ml的2%FBS的培養(yǎng)基：9.7ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基+0.2ml FBS（2%）+0.1ml雙抗（1%)

• 成品雙抗（分裝，20℃下凍存，用1ml離心管分裝）

• 成品PBS：1×：50mlPBS=49.5mlPBS+0.5ml雙抗（1ml凍存液）

• 2×：50mlPBS+49.00mlPBS+1ml雙抗(凍存）

• 4個(gè)60mm培養(yǎng)基（分別裝PBS*2、10%FBS的培養(yǎng)基*2/1.5ml）

• 15ml的試管

(2)具體操作：

1、將大鼠脫頸處死，放于裝有酒精的燒杯中備用。給小鼠剝皮的過程可將小鼠置于盛有適量75%酒精的60mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行處理，個(gè)人建議每次單人操作不要超過2只小鼠，2只小鼠的細(xì)胞量已經(jīng)足夠，再多會(huì)延長提取時(shí)間這對細(xì)胞活性是個(gè)重大打擊。

2、為避免細(xì)胞污染可將小鼠整個(gè)大腿分離后置于含有雙倍雙抗?jié)舛萈BS的60mm培養(yǎng)皿中暫存，待2只小鼠共四只大腿全部分離后在同一培養(yǎng)皿中用眼科剪及眼科鑷分離股骨和脛骨表面的肌肉，我自己分離時(shí)喜歡先用剪刀剪開髕韌帶之后順著這個(gè)剪開的縫隙將大腿分成股骨和脛骨兩段，然后將脛骨遠(yuǎn)端的幾根肌腱用眼科有齒鑷從骨頭上剝離，之后夾住肌肉將其從骨頭上撕下來，把那部分連著的腓骨也剪斷然后剝下來只留一根脛骨，將這段骨頭在另一個(gè)干凈的含有1X雙抗培養(yǎng)液的60mm培養(yǎng)皿中暫存。

3、待所有骨頭表面肌肉清理干凈后用剪刀剪開兩端骨骺，注意暴露骨髓腔后的骨頭不要再放回原來的培養(yǎng)皿，可再備另一個(gè)含有雙抗培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿用于暫時(shí)存放已經(jīng)剪開骨骺的骨頭（骨髓腔內(nèi)為無菌環(huán)境，剪開后放回原培養(yǎng)皿可能導(dǎo)致污染和細(xì)胞損失)。

4、沖洗干凈后將含有骨髓的培養(yǎng)皿中的細(xì)胞懸液收集到15ml離心管中用1ml移液槍反復(fù)吹打至無明顯細(xì)胞團(tuán)后離心去上清（這步也可以去除潛在的細(xì)菌，因?yàn)榧?xì)菌較輕，如果細(xì)胞間無菌等級高個(gè)人認(rèn)為可以跳過離心這步直接講細(xì)胞懸液吹勻后放入培養(yǎng)箱內(nèi)3h后換液）。

5、短時(shí)間內(nèi)換液可以有效去除雜細(xì)胞，但為了防止干細(xì)胞的丟失個(gè)人建議在第一次換液時(shí)將換下的培養(yǎng)液接種到另一個(gè)新的培養(yǎng)皿中補(bǔ)加少量培養(yǎng)基放入孵箱內(nèi)等待第一個(gè)8h后將2個(gè)培養(yǎng)皿同時(shí)換液。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

 深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供服務(wù)。