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    平滑肌細(xì)胞的分離和培養(yǎng)

    發(fā)布時(shí)間: 2022-12-09  點(diǎn)擊次數(shù): 1677次

    料與儀器

    0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液
    平滑肌培養(yǎng)液
    Petri培養(yǎng)皿 手術(shù)刀和10號(hào)手術(shù)刀片 解剖剪 組織鑷

    步驟

    1. 從小牛取胸主動(dòng)脈。

    2. 將胸主動(dòng)脈浸入 Hanks 液。

    3. 分離細(xì)胞之前將動(dòng)脈放在冰上。

    4. 將動(dòng)脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養(yǎng)皿。

    5. 用解剖剪沿長(zhǎng)軸剪開動(dòng)脈。

    6. 用手術(shù)刀片輕刮動(dòng)脈內(nèi)腔面,以除去內(nèi)皮細(xì)胞。

    7. 將動(dòng)脈的中膜與內(nèi)膜和外膜分離。

    8. 將中膜切成約 1 cm2 大小的組織塊。

    9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養(yǎng)皿,內(nèi)膜側(cè)朝下。

    10. 讓組織塊貼壁約 10 min。

    11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM(平滑肌培養(yǎng)液(smooth muscle cell medium,SMCM):DMEM 添加 20 % FBS,100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素)。

    12. 將組織塊放入濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱,在 37°C 和 10% CO2 條件下孵育。

    13. 第 2 天加入 5 ml SMCM,注意勿讓組織塊去附著。

    14. 將組織塊繼續(xù)孵育 10 d。此后,平滑肌細(xì)胞從組織塊遷移出來,并變?yōu)閱螌印?br style="border: 0px solid currentcolor; box-sizing: border-box; --tw-shadow:0 0 #0000; max-width: 100%; background: none !important; font-size: 0.32rem !important; line-height: 0.48rem !important; margin: 0px !important;"/>
    15. 細(xì)胞生長(zhǎng)接近形成單層時(shí),用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。


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