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    qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析基本步驟(一)

    發(fā)布時間: 2021-10-15  點(diǎn)擊次數(shù): 11533次

    實(shí)時熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)會產(chǎn)生大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),一般可以用PCR儀自帶的軟件進(jìn)行收集、分析。但即使有了方便可靠的軟件,我們也需要對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行檢查、再分析,評估數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可靠性。


    這需要三個基本的步驟。


    第一步,查看擴(kuò)增曲線,有必要時調(diào)整基線和閾值。

    qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析基本步驟(一)

    Ct值由基線和閾值計算得來,所以他們的值對結(jié)果影響很大。軟件會給出1個默認(rèn)的基線和閾值,但不一定是最合適的,需要我們進(jìn)行手動調(diào)整。

    首*行基線的調(diào)整。


    一般范圍是循環(huán)數(shù)3~15,使得靶基因的擴(kuò)增信號大于背景噪聲。出現(xiàn)不正常的擴(kuò)增曲線,通常是因?yàn)樵O(shè)置了不正常的基線,需要對單個孔進(jìn)行設(shè)置。


    比較好的做法是,基線的最小值(起始循環(huán)數(shù))設(shè)置在背景噪聲的尾巴后,最大值(結(jié)束循環(huán)數(shù))設(shè)置為擴(kuò)增起始點(diǎn)。


    循環(huán)范圍在5個循環(huán)就可以,具體跟擴(kuò)增曲線的對數(shù)圖來設(shè)定。


    擴(kuò)增曲線的對數(shù)圖是什么?下期告訴你



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